1、试剂配制

请按下表配制各试剂。配制好的试剂再次使用前，应从冰箱取出并恢复至室温后再检测。

1.1 缓冲液的调配

（1）取1包缓冲剂倒入 500 mL 纯净水（或蒸馏水）中；

（2）摇匀溶解成磷酸盐缓冲液（pH 8.0）；

（3）调配完成后密闭、常温保存即可。

1.2 显色剂的调配

（1）取1瓶显色剂，加入 10 mL 缓冲液；

（2）摇匀溶解，使用时每次取 100 µL；

（3）配制后放入 0～5℃ 冰箱冷藏保存，以便下次使用。

1.3 底物的调配

（1）取1瓶底物，加入 10 mL 纯净水或蒸馏水；

（2）摇匀溶解，使用时每次取 100 µL；

（3）配制后放入 0～5℃ 冰箱冷藏保存，以便下次使用。

注意：胆碱酯酶无需配制，直接取用，每次取 100 µL，用后及时放回冷藏保存。请坚持用完一瓶再配制一瓶，避免试剂变质。

2、样品前处理

（1）选取有代表性的样品，擦去表面泥土，剪成约 1 cm 见方的碎片；

（2）称取 2 g 样品（块茎类样品取 4 g），放入样品杯（瓶）中；

（3）加入 10 mL 缓冲液，振荡 1～2 min，使样品中的农药充分溶出；

3 、静置 2 min，取上清液作为待测样品液备用。

注意：对于葱、蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇、番茄等含有对酶有影响的植物次生物质的样品，以及叶绿素含量较高的蔬菜，建议采用整株（整体）浸提方式处理，以减少干扰。

2、上机检测流程

检测前请提前开启农残速测仪预热稳定，并将恒温装置预热至 37℃。每批次样品检测必须先做对照测试。

2.1 对照测试

（1）在专用反应瓶中加入 2.5 mL 缓冲液；

（2）加入 100 µL 显色剂和 100 µL 胆碱酯酶，混匀；

（3）于 37℃ 放置 15 min；

（4）加入 100 µL 底物，摇匀后立即倒入比色杯；

（5）放入仪器比色池，按"对照"键测试 3 min 的吸光度变化值 ΔA0。

2.2 样品测试

（1）在专用反应瓶中加入 2.5 mL 待测样品液；

（2）加入 100 µL 显色剂和 100 µL 胆碱酯酶，混匀；

（3）于 37℃ 放置 15 min；

（4）加入 100 µL 底物，摇匀后立即倒入比色杯；

（5）放入仪器比色池，按"样品"键测试 3 min 的吸光度变化值 ΔAt，仪器自动计算抑制率。

提示：在加底物环节，可预先将底物加入比色杯，静置时间到后立即将反应液倒入比色杯并上机测试，以减少时间误差。

3、结果判读

仪器根据 3 min 吸光度变化值自动计算抑制率：抑制率(%) =（ΔA0 − ΔAt）/ ΔA0 × 100%。按 GB/T 5009.199-2003，判定规则如下：

判定结果 抑制率 结果说明

阴性 抑制率 < 50% 样品中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留未超出限值

阳性 抑制率 ≥ 50% 样品中农药残留超出限值；需重新取样重复检测2次以上，多次阳性应送气相色谱等仪器方法确证

注：酶活性正常情况下，对照测试 3 min 的吸光度变化值 ΔA0 应在 0.3 以上；若 ΔA0 过低，说明酶活性不足或操作有误，应更换试剂重新检测。